Cytométrie en flux
Le plateau de Cytométrie et Imagerie en flux, situé dans le Centre de Biologie et de Recherche en Santé côté hospitalier, est une structure ouverte à tous les personnels appartenant aux unités de l’Université de Limoges mais également aux autres unités de recherche publiques et aux entreprises privées.
Le plateau propose un ensemble de prestations axées autour de la cytométrie en flux multiparamétriques, du tri cellulaire et de l’imagerie en flux.
Des formations spécifiques et personnalisées sont assurées pour rendre les utilisateurs autonomes sur les différents équipements ; une aide pour la conception des expériences et une assistance pour l’analyse des données peuvent également être proposées.
Le plateau de Cytométrie et Imagerie en flux possède les équipements suivants :
- Trieur FACS ARIA III : 4 lasers, 18 couleurs
- Analyseurs :
- FACs Calibur : 2 lasers, 4 couleurs
- CytoFlex LX : 6 lasers, 25 couleurs
- Imageur en flux (Amnis®) : 4 lasers, 11 couleurs
Personnel du plateau
Intérêt :
- Mesurer la fluorescence ou la lumière diffractée d’un grand nombre de particules à haute vitesse telles que des cellules, billes, bactéries, levures ou organites.
- Quantifier de multiples marqueurs sur des cellules avec la possibilité d’identifier simultanément plusieurs sous-populations d’intérêt.
Compétences en analyses cellulaires :
- Immunomarquages et phénotypages multicouleurs en surface et en intracellulaire,
- Mesure du contenu en ADN (cycle cellulaire) et incorporation de BrdU,
- Etude de marqueurs de l’apoptose (Potentiel mitochondrial, Activité des caspases, externalisation des phosphatidylsérines, fragmentation de l’ADN, …)
- Activités fonctionnelles (viabilité, activités enzymatiques, …)
- Bactériologie (viabilité, activités enzymatiques, …)
- Conseils pour la mise en place de panels d’anticorps et de marquages
Caractéristiques technologiques :
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FACS Calibur
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CytoFlex LX
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Intérêt :
- Effectuer une analyse rapide de cellule à cellule, permettant l’obtention de populations pures et spécifiques.
- Il est ainsi possible d’effectuer une remise en culture des cellules et d’effectuer des analyses complémentaires sur une population spécifique
- Possibilité de trier différents types cellulaires : cellules animales et végétales, levures, bactéries.
Compétences en tri cellulaire :
- Le trieur haut débit FACSAria permet de trier simultanément jusqu’à 4 populations cellulaires à une vitesse maximale de 10000 cellules à la seconde.
- L’analyse est réalisée en amont de la distribution des cellules dans les gouttes et n’est pas soumise aux instabilités possibles du jet comme sur les trieurs « jet in air ».
Caractéristiques technologiques :  |
Pour plus d’informations techniques sur FACSAria III consulter la page BD FACSAria |
Intérêt :
- Réaliser des tris rapides monocellulaires en plaques multi puits
- Il est ainsi possible d’effectuer une remise en culture des cellules et d’effectuer des analyses complémentaires sur une population spécifique
Applications :
- Clonage en plaque
- Single cell PCR, …
- Dépôt sur lame
Caractéristiques technologiques :
- Le trieur haut débit FACSAria possède un module ACDU permettant de recueillir les cellules triées dans des plaques 24, 96, sur des lames….
- Mode clonage: dépôt de 1 cellule/puits avec une pureté > 99,9%
- Vitesse de déplacement du bras : 3,8 cm/sec
- Vitesse de clonage pour plaque de 96 puits: 45s
Pour plus d’informations techniques sur FACSAria III consulter la page BD FACSAria
Intérêt :
- Cette technologie permet de combiner des données quantitatives immunophénotypiques et cyto-morphologiques sur cellules en suspension.
Compétences en analyses cellulaires :
- Analyse sur cellules vivantes ou fixées
- Analyse de pseudopodes (déformation de la membrane plasmique)
- Signalisation cellulaire
- Translocation nucléaire de facteurs de transcription
- Colocalisation
- Etude de l’apoptose
Caractéristiques technologiques :
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Pour plus d’informations techniques sur Mark II consulter la page merckmillipore ImageStreamX |
Logiciel de retraitement de données : Afin de faciliter l’accès au retraitement des données, le plateau de cytométrie a mis à disposition des utilisateurs plusieurs licences serveurs pour les logiciels Flowlogic, Kaluza, Infinicyt. Modfit Logiciel d’analyse du cycle cellulaire uniquement sur un poste fixe
Modalités d'accès
N’hésitez pas à prendre contact avec le plateau () pour plus d’information sur les conditions d’utilisation et les possibilités d’analyses que nous pouvons vous offrir. Pour les utilisateurs autonomes, un calendrier de réservation est mis à disposition à cette adresse.
Pour toute demande ou réservation, un code projet vous sera demandé. Si vous n’en avez pas, merci de remplir le formulaire de dépôt de projet (utilisateurs de l’Université de Limoges uniquement). Pour les utilisateurs extérieurs, merci de prendre contact avec BISCEm pour l’attribution de votre code projet.