Pôle Cytométrie en flux


Le plateau de Cytométrie et Imagerie en flux, située au sein du pôle Bio-santé de l’université de Limoges, propose un ensemble de prestations axées autour de la cytométrie en flux multi-paramétrique, du tri cellulaire et de l’imagerie en flux. Des formations spécifiques et personnalisées sont assurées pour rendre les utilisateurs autonomes sur les différents équipements ; une aide pour la conception des expériences et une assistance pour l’analyse des données peuvent également être proposées. Le plateau est une structure ouverte à tous les personnels appartenant aux unités constituantes de l’Institut de recherche GEIST mais également aux autres unités de recherche publiques de et hors Limoges et aux entreprises privées.

Le plateau de cytométrie et imagerie en flux possède les équipements suivants :

1 Trieur FACS Vantage SE Diva (tri rapide)
1 Analyseur 15 couleurs
1 Imageur en flux (Amnis®) 12 couleurs
Le service couvre différents domaines d’applications (cancérologie, immunologie, biologie cellulaire, bactériologie…). Les appareils sont réservés grâce à un service de réservation en ligne.

Catherine OUK

Ingénieure d'Etudes, Responsable technique

Jean FEUILLARD

PU-PH, Référent scientifique

Intérêt :

  • Mesurer la fluorescence ou la lumière diffractée d’un grand nombre de particules à haute vitesse telles que des cellules, billes, bactéries, levures ou organites
  • Quantifier de multiples marqueurs sur des cellules avec la possibilité d’identifier simultanément plusieurs sous-populations d’intérêt

Compétences en analyses cellulaires :

  • Immunomarquages et phénotypages multicouleurs en surface et en intracellulaire
  • Mesure du contenu en ADN (cycle cellulaire) et incorporation de BrdU
  • Etude de marqueurs de l’apoptose (Potentiel mitochondrial, Activité des caspases, externalisation des phosphatidylsérines, fragmentation de l’ADN,…)
  • Activités fonctionnelles (viabilité, activités enzymatiques,…)
  • Bactériologie (viabilité, activités enzymatiques,…)
  • Conseils pour la mise en place de panels d’anticorps et de marquages

Intérêt :

  • Effectuer une analyse rapide de cellule à cellule, permettant l’obtention de populations pures et spécifiques
  • Il est ainsi possible d’effectuer une remise en culture des cellules et d’effectuer des analyses complémentaires sur une population spécifique
  • Possibilité de trier différents types cellulaires (cellules animales et végétales, de levures, de bactéries)

Compétences en tri cellulaire :

  • Le trieur haut débit FACSAria permet de trier simultanément jusqu’à 4 populations cellulaires à une vitesse maximale de 10000 cellules à la seconde
  • L’analyse est réalisée en amont de la distribution des cellules dans les gouttes et n’est pas soumise aux instabilités possibles du jet comme sur les trieurs « jet in air »
  • L’Aria peut lire 16 fluorescences simultanément grâce aux sources d’excitation à, 407 nm, 488nm, 561nm et 633nm

Pour plus d’informations techniques sur FACSAria III consulter la page BD FACSAria

Intérêt :

  • Réaliser des tris rapides monocellulaires en plaques multi puits
  • Il est ainsi possible d’effectuer une remise en culture des cellules et d’effectuer des analyses complémentaires sur une population spécifique

Applications : clonage en plaque, single cell PCR,…

Caractéristiques technologiques :

  • Le trieur haut débit FACSAria possède un module ACDU permettant de recueillir les cellules triées dans des plaques 24, 96, sur des lames….
  • Mode clonage: dépôt de 1 cellule/puits avec une pureté > 99,9%
  • Vitesse de déplacement du bras : 3,8 cm/sec
  • Vitesse de clonage pour plaque de 96 puits: 45s

Pour plus d’informations techniques sur FACSAria III consulter la page BD FACSAria

Intérêt :

  • Cette technologie permet de combiner des données quantitatives immunophénotypiques et cyto-morphologiques sur cellules en suspension.

Compétences en analyses cellulaires :

  • Analyse sur cellules vivantes ou fixées
  • Analyse de pseudopodes (déformation de la membrane plasmique)
  • Signalisation cellulaire
  • Translocation nucléaire de facteurs de transcription
  • Colocalisation
  • Etude de l’apoptose

Pour plus d’informations techniques sur Mark II consulter la page merckmillipore ImageStreamX

FACSDiva Software

  • Ce logiciel est installé sur l’ensemble des analyseurs et trieur pour l’acquisition des données et leur mise en page.

Modfit

  • Logiciel d’analyse du cycle cellulaire

Implication dans la formation

Cours en M2 Bio-santé de l’Université de Limoges

Co-encadrement stagiaire M2

Participation à la diffusion de la culture scientifique (Atelier scientifique)